Les réponses Th17 et les anticorps IgM naturels sont liés à la composition du microbiote intestinal chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé

Rapports scientifiques volume 6, Numéro d'article : 24072 (2016) Citer cet article

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Une dysbiose intestinale, caractérisée par une diminution du rapport Firmicutes/Bacteroidetes, a été rapportée chez des patients atteints de lupus érythémateux disséminé (LES). Dans cette étude, des cultures in vitro ont révélé que le microbiote isolé à partir d'échantillons de selles de patients atteints de SLE (SLE-M) favorisait l'activation des lymphocytes et la différenciation Th17 des lymphocytes CD4+ naïfs dans une plus grande mesure que le microbiote témoin sain. L'enrichissement de SLE-M avec des bactéries induisant des Treg a montré qu'un mélange de deux souches de Clostridia réduisait significativement l'équilibre Th17/Th1, tandis que la supplémentation en Bifidobacterium bifidum empêchait la suractivation des lymphocytes CD4+, soutenant ainsi un éventuel bénéfice thérapeutique des probiotiques contenant des souches inductrices de Treg afin de rétablir le déséquilibre Treg/Th17/Th1 présent dans le LES. En fait, des analyses ex vivo d'échantillons de patients ont montré des populations Th17 et Foxp3+ IL-17+ élargies, suggérant une possible trans-différenciation Treg-Th17. De plus, les analyses du microbiote fécal ont révélé une corrélation négative entre les populations d'IL-17+ et les Firmicutes chez les témoins sains, alors que dans le LES, ce phylum était directement corrélé aux taux sériques d'IFNγ, une cytokine Th1 légèrement réduite chez les patients. Enfin, la fréquence des Synergistetes, corrélée positivement avec le rapport Firmicutes/Bacteroidetes chez les témoins sains, avait tendance à être réduite chez les patients lorsque les titres anti-dsDNA étaient augmentés et présentait une forte corrélation négative avec les taux sériques d'IL-6 et corrélée positivement avec la protection naturelle. Anticorps IgM contre la phosphorylcholine.

Le lupus érythémateux disséminé (LES) est une maladie auto-immune chronique déclenchée par une combinaison de facteurs environnementaux et génétiques qui entraînent une rupture de la tolérance envers les auto-antigènes1. La production subséquente d'auto-anticorps par les cellules B autoréactives constitue un facteur pathologique clé dans le LES, car elle conduit à la formation et au dépôt de complexes immuns qui causent des lésions tissulaires2. De même, les cellules CD4+ naïves activées par la reconnaissance de tels auto-antigènes peuvent être différenciées en plusieurs sous-ensembles basés sur le modèle de cytokines présentes dans l'environnement local3. En plus du paradigme bien connu de la réponse immunitaire des cellules Th1/Th2, de nombreuses preuves révèlent aujourd'hui la présence d'altérations dans les cellules Th17 et T régulatrices (Treg) dans la maladie du LED4,5,6. En ce qui concerne les cellules Th17, certaines études soutiennent leur rôle central en tant que principaux moteurs des réponses auto-immunes dans le LES par la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires impliquées dans l'inflammation locale et la destruction des tissus, notamment l'IL-17, l'IL-22 et l'IL-237,8. En conséquence, des taux circulants accrus d'IL-17 et de lymphocytes T producteurs d'IL-17 ont été récemment rapportés dans le SLE9,10,11. De plus, il a également été démontré que les cellules T productrices d'IL-17 s'infiltrent dans les poumons, la peau et les reins chez les patients atteints de lupus, contribuant ainsi à endommager les organes10,12. A l'inverse, les cellules Treg sont essentielles pour prévenir les maladies auto-immunes et inflammatoires, car elles présentent une activité suppressive sur les réponses effectrices aberrantes13. Les cellules Treg naturelles émergent du thymus et sont principalement caractérisées par la présence de niveaux élevés de CD25 (chaîne IL2Rα) et de FOXP3, un facteur de transcription nécessaire au développement et au fonctionnement des cellules Treg14. De plus, les cellules Treg pourraient être développées ou induites dans les tissus périphériques en réponse à divers antigènes15. La plupart des études font état d'un nombre réduit ou d'une altération de la fonction des cellules Treg circulantes chez les patients atteints de LES16,17,18.

De plus en plus de preuves suggèrent que la composition du microbiote commensal colonisant l'intestin affecte la différenciation des cellules immunitaires présentes dans les tissus lymphoïdes associés à l'intestin (GALT)19. Plus précisément, les cellules plasmatiques de la lamina propria sont impliquées dans la production d'anticorps indépendants des lymphocytes T contre les composants des bactéries commensales et pathogènes ainsi que des cellules apoptotiques, appelées anticorps IgM naturels20. Fait intéressant, plusieurs études ont rapporté des fonctions immunorégulatrices des anticorps IgM naturels inhibant la signalisation inflammatoire dans les cellules immunitaires innées et supprimant les maladies auto-immunes21,22. D'autre part, après la reconnaissance des antigènes bactériens, les cellules dendritiques intestinales (CD) peuvent induire la différenciation des lymphocytes T CD4+ naïfs en différents types de lymphocytes T effecteurs ou régulateurs23,24,25,26. Dans des conditions physiologiques, le microbiote normal présenté chez les individus sains favorise le maintien de l'homéostasie immunitaire intestinale27. A l'inverse, plusieurs études suggèrent que les altérations de la composition du microbiote intestinal, connues sous le nom de dysbiose, pourraient être un facteur critique dans le développement de nombreuses pathologies à médiation immunitaire, probablement chez des hôtes sensibles à la maladie, par la génération d'un déséquilibre entre les cellules Th et Treg19 ,28,29,30,31. En ce sens, la dysbiose intestinale a été associée au développement de plusieurs maladies auto-immunes, notamment les maladies inflammatoires de l'intestin, le diabète de type 1, la polyarthrite rhumatoïde et la sclérose en plaques32,33,34,35,36,37,38. À cet égard, nous avons récemment décrit une dysbiose intestinale associée au LES caractérisée par un rapport Firmicutes/Bacteroidetes significativement plus faible, le phyla le plus abondant dans l'intestin humain39 qui a été précédemment décrit comme déséquilibré dans d'autres troubles37,38,40. Puisque ces études suggèrent que le microbiote pourrait contrôler l'axe Th/Treg en dehors de l'intestin, la stimulation immunitaire par des bactéries spécifiques pourrait avoir un effet bénéfique sur les maladies inflammatoires33. Ainsi, il est connu que certaines souches bactériennes pourraient induire la génération de cellules Treg (iTreg) à partir de précurseurs naïfs23,41,42,43. Plus précisément, l'accumulation de preuves soutient le rôle des souches commensales de Bifidobacterium et Clostridium spp. appartenant aux clusters IV et XIVa dans l'induction des cellules Treg23,41,42,43.

L'étude vise à évaluer l'influence du microbiote fécal obtenu à partir de patients atteints de LED et de témoins sains dans la différenciation in vitro des populations Th et Treg ainsi que l'effet possible de l'enrichissement du microbiote intestinal de LED avec des bifidobactéries et des souches de Clostridia connues pour être des inducteurs de cellules Treg. . Ensuite, nous avons analysé la relation possible entre la dysbiose intestinale associée au LES et la présence de paramètres immunitaires caractéristiques de ces patients, tels que les populations de Treg/Th, les niveaux de cytokines, l'activité de la maladie et la production à la fois d'anti-dsDNA pathogènes et de protecteurs naturels. Anticorps IgM anti-phosphorylcholine.

Compte tenu de la dysbiose intestinale récemment rapportée chez des patients atteints de LES39, nous avons cherché à évaluer l'influence du microbiote fécal obtenu à partir de patients atteints de LES (LES-M) et de témoins sains (HC-M) dans la différenciation in vitro des cellules T régulatrices (Treg), comme ainsi que des populations effectrices Th1 et Th17 de lymphocytes T CD4+ naïfs. De plus, pour estimer l'effet de l'enrichissement du microbiote intestinal avec des souches capables d'augmenter le sous-ensemble de Treg, 5, 10 ou 30 % de SLE-M ont été remplacés par les mêmes quantités de Bifidobacterium bifidum LMG13195 (Bb), une souche connue pour induire Expression de Foxp323,41, ou avec un mélange de deux souches de Clostridia (Cl) avec un effet inducteur de Treg putatif (Ruminococcus obeum DSM25238 et Blautia coccoides DSM935)42,43. Ainsi, des DC immatures dérivées de monocytes ont été traitées pendant 48h avec du LPS, comme contrôle de maturation, ou avec les différentes préparations bactériennes puis utilisées pour amorcer des lymphocytes T naïfs CD4+CD45RA+. Après 12 jours de culture en présence d'IL-2, les populations Treg (CD4+CD25highCD127lowFoxp3+), Th17 et Th1(IFNγ- et IL-17-exprimant respectivement) ont été déterminées par cytométrie en flux dans des lymphocytes CD4+.

Comme prévu, la stimulation et l'expansion avec l'IL-2 ont induit l'expression de l'IL-2Rα (CD25) dans la plupart des lymphocytes CD4 + (Fig. 1A), mais la quantité de cellules présentant des niveaux élevés de CD25 (CD25high) a montré des différences entre les traitements (Fig. 1B). Plus précisément, les cultures SLE-M avaient tendance à générer plus de cellules CD25high que HC-M, alors que les niveaux les plus bas de cette population étaient obtenus après stimulation avec la souche Bb. En fait, l'effet régulateur à la hausse du SLE-M sur l'expression de CD25 a été inversé après la supplémentation en Bb. En ce qui concerne les cellules Treg (CD4+CD25high CD127lowFoxp3+), aucune différence significative n'a été observée entre la stimulation HC-M ou SLE-M. Cependant, la proportion de cellules Foxp3 + incluses dans la population CD25high était plus faible dans SLE- que dans les cultures dérivées de HC-M (Fig. 1C), suggérant ainsi qu'une partie des cellules CD25high générées en présence de SLE-M étaient plutôt des lymphocytes activés. que les cellules Treg. De manière inattendue, bien que Bb ait considérablement augmenté les cellules Foxp3 +, la supplémentation en SLE-M avec cette souche n'a pas augmenté la génération de cellules Foxp3 + dans le sous-ensemble CD25high.

Des lymphocytes naïfs CD4+CD45RA+ ont été co-cultivés pendant 12 jours avec des DC préalablement maturées avec du LPS (maturation control), du microbiote fécal isolé de témoins sains (HC-M) ou de patients SLE (SLE-M) ainsi qu'avec Bifidobacterium bifidum LMG13195 ( Bb), des souches de Clostridia (Cl) ou SLE-M contenant 5, 10 ou 30 % de Bb ou Cl. Les cellules T CD4+ cultivées ont été récupérées, colorées pour les marqueurs Treg, IL-17 et IFNγ et analysées par cytométrie en flux. (A) Stratégie de déclenchement séquentiel utilisée pour identifier les cellules Treg (CD4+CD25highCD127lowFoxp3+). Les cellules positives pour chaque marqueur ont été déterminées en utilisant la fluorescence des cellules marquées avec le MAb non pertinent conjugué correspondant à l'isotype correspondant comme témoin négatif. Les lymphocytes T CD4+ présentant l'expression de CD25 la plus élevée ont été identifiés comme CD4+CD25high. Ensuite, la population de CD25high a été analysée pour déterminer la proportion de cellules exprimant Foxp3 (Foxp3+ dans CD25high) ainsi que la quantité de cellules Treg (CD25highCD127lowFoxp3+). Les parcelles de densité correspondent à une expérience représentative. Analyses de (B) population élevée de CD25, (C) cellules Foxp3+ au sein de la population élevée de CD25 et (C) expression d'IL-17/IFNγ. Les barres représentent la moyenne et le SEM de sept expériences indépendantes réalisées avec différents donneurs de sang. Les différences statistiques entre les SLE-M et les différents traitements ont été évaluées par le test de Wilcoxon pour les données appariées. *p < 0,1 ; **p < 0,05.

Enfin, bien qu'aucune différence significative n'ait été détectée dans l'expression de l'IL-17 ou de l'IFNγ entre les cellules traitées avec les deux microbiotes fécaux, le rapport IL-17/IFNγ était significativement plus élevé dans les cultures SLE- que dans les cultures HC-M, alors que le rapport le plus bas était induit par DC conditionnés au Cl. De plus, la supplémentation en SLE-M avec Cl, mais pas avec Bb, a induit une réduction dose-dépendante significative de l'équilibre IL-17 / IFNγ (Fig. 1D). Par conséquent, la stimulation in vitro des lymphocytes T CD4+ naïfs avec SLE-M semble favoriser l'activation des lymphocytes et la différenciation Th17 dans une plus grande mesure que le traitement HC-M, soutenant ainsi les perturbations Th17/Treg dans le LES. De plus, l'enrichissement du microbiote SLE avec Bb peut empêcher l'activation des lymphocytes alors que la supplémentation en Cl restaure l'équilibre Th17/Th1.

Pour savoir si les réponses Treg/Th induites in vitro par le LES-M pouvaient refléter les caractéristiques immunitaires caractéristiques des patients atteints de LES, nous avons analysé l'expression de Foxp3, CD25, CD127, IL-17 et IFNγ dans les lymphocytes CD4+ du sang périphérique frais ainsi que dans le sérum. niveaux d'une batterie de cytokines chez 37 patients LED et 36 patients HC (tableau 1). De plus, puisque 40 de ces individus (20 SLE et 20 HC) ont été préalablement inclus dans une étude métagénomique du microbiote fécal39 (Tableau 2), nous avons déterminé la relation possible entre ces paramètres immunitaires et la dysbiose intestinale associée au SLE.

Les résultats ont montré une fréquence accrue de cellules Th17 chez les patients atteints de SLE par rapport à HC, en particulier chez ceux présentant des anticorps anti-dsDNA, alors qu'aucune différence significative n'a été observée dans le sous-ensemble Th1 (Fig. 2A). De plus, les cellules doublement positives Foxp3 + IL-17 + étaient significativement augmentées chez les patients atteints de LED par rapport à HC, les niveaux les plus élevés de ces cellules étant à nouveau observés chez les patients présentant des anticorps anti-dsDNA (Fig. 2B). Aucune différence significative n'a été détectée dans le pourcentage de cellules Treg (CD4+ CD25high CD127lowFoxp3+), suggérant qu'un processus de trans-différenciation Treg-Th17 pourrait être impliqué dans le développement de cellules Foxp3+ sans activité régulatrice chez les patients atteints de LED.

L'expression de Foxp3, CD25, CD127, IL-17 et IFNγ a été analysée dans des lymphocytes CD4+ de sang périphérique frais de patients atteints de LES et de HC. (A) Les parcelles de points montrent des cellules positives pour l'expression de l'IL-17 ou de l'IFNγ, déterminées en fonction de la fluorescence des cellules marquées avec le MAb non pertinent conjugué à l'isotype correspondant comme témoin négatif. Les diagrammes de dispersion représentent le pourcentage de cellules CD4+ IL-17+ (Th17) et IFNγ+ (Th1) chez les patients HC et LED présentant (pos) ou non (neg) des anticorps anti-dsDNA (aDNA). Les barres horizontales indiquent la médiane. (B) Les cellules Treg ont été séquentiellement identifiées comme des cellules CD4+CD25highCD127lowFoxp3+. Les diagrammes de dispersion représentent la quantité de cellules Treg, Foxp3+ IL-17+ et Foxp3+ IFNγ+ chez les patients HC et SLE en fonction de leur statut anti-dsDNA, et les barres horizontales montrent la médiane. Les différences statistiques entre les groupes ont été évaluées par le test de Kruskal-Wallis et le post-test de Dunn a été effectué pour déterminer quelles paires de groupes avaient des moyennes différentes. **p < 0,01 ; ***p < 0,001.

En revanche, l'analyse du microbiote fécal dans le groupe HC a révélé une corrélation négative entre la fréquence des Firmicutes et la taille du sous-ensemble Th17, notamment dans les cellules Foxp3+ IL-17+, alors que l'inverse s'est produit avec les Bacteroidetes (Tableau 3 ); toutes ces corrélations ont été confirmées par des analyses de régression linéaire multivariée ajustées par le poids, l'IMC et les lipides sanguins (*p < 0,05, R2 > 0,6). Cependant, de telles associations étaient complètement absentes chez les patients, en accord avec notre réduction précédemment décrite du rapport Firmicutes/Bacteroidetes dans le LED.

En ce qui concerne les taux sériques de cytokines, les patients atteints de LED présentaient des quantités plus élevées d'IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-17A, IFNα, TNFα, GM-CSF, BLyS et leptine que HC, alors que l'IFNγ a montré une nette tendance à la réduction (Fig. 3A). Fait intéressant, aucune des cytokines augmentées ou inchangées dans le SLE n'a montré d'associations significatives avec Firmicutes ou Bacteroidetes, cependant, les niveaux d'IFNγ étaient corrélés négativement avec Bacteroidetes et positivement avec Firmicutes et le rapport Firmicutes / Bacteroidetes chez les patients (Fig. 3B). Ces associations n'ont pas été détectées dans HC.

(A) La boîte et les moustaches représentent la plage médiane et interquartile des quantités circulantes de cytokines chez les patients atteints de SLE par rapport aux témoins. Les différences entre les deux groupes ont été évaluées par le test U non paramétrique de Mann-Whitney. (B) Les corrélations entre les taux sériques d'IFNγ et la fréquence des Firmicutes, Bacteroidetes ou le rapport Firmicutes à Bacteroidetes (F/B) chez les patients atteints de LES ont été évaluées à l'aide du test de Spearman.

Comme nous l'avons déjà signalé39, la proportion de Synergistetes fécaux n'a pas montré de différences significatives entre les patients atteints de LED et les témoins sains. Cependant, nous avons trouvé une tendance de corrélation négative entre ce groupe bactérien et le titre d'anticorps anti-dsDNA (r = -0, 386, p = 0, 084), non détectée avec aucun autre des groupes microbiens précédemment analysés. De même, les taux sériques d'IL-6 étaient associés négativement à la quantité de Synergistetes chez les patients atteints de LES (r = -0, 738, p <0, 001), suggérant ainsi une relation possible entre ce groupe bactérien et l'activité de la maladie ou la production d'anticorps. Par conséquent, dans le but d'élargir les connaissances sur le rôle possible joué par les Synergistetes intestinaux dans le développement des réponses immunitaires humorales, nous avons quantifié les niveaux sériques d'IgM anti-PC, d'anticorps protecteurs naturels et d'IgG anti-PC (sans cet effet) ainsi que IgM et IgG circulantes totales. Aucune différence significative n'a été détectée dans les anticorps anti-PC (IgM et IgG) et les IgM totales entre les patients et les témoins, mais la quantité d'IgG totale a été augmentée chez les patients par rapport aux témoins (p = 0,027). Fait intéressant, le titre anti-dsDNA était corrélé négativement avec les anticorps anti-PC d'isotype (IgM : r = −0,508, p = 0,019 ; IgG : r = −0,460, p = 0,036) et avec les IgM totales (r = −0,501, p = 0,021) mais pas les taux d'IgG (r = 0,065, p = 0,780), suggérant ainsi un effet néfaste de l'activité de la maladie SLE sur les anticorps IgM protecteurs naturels.

En revanche, Synergistetes a montré une corrélation positive avec les IgM totales et anti-PC chez les patients atteints de LES et avec le rapport IgM/IgG totales et anti-PC chez les patients et les témoins (Tableau 4). Fait intéressant, les taux sériques d'IL-6 chez les patients ont montré des associations opposées. Tous ces résultats suggèrent que les Synergistetes intestinaux pourraient favoriser le développement d'anticorps IgM naturels protecteurs, un effet particulièrement pertinent chez les patients atteints de LES puisque les niveaux accrus d'anti-dsDNA et/ou d'IL-6 pourraient réguler négativement ce groupe bactérien.

Enfin, il convient de noter que Synergistetes était corrélé négativement avec Bacteroidetes (r = −0,486, p = 0,022) et positivement avec le rapport Firmicutes/Bacteroidetes (r = 0,443, p = 0,039) chez les témoins, mais pas chez les patients lupiques (r = 0,075 , p = 0,745 et r = −0,136, p = 0,556, respectivement), confirmant le rôle de ces groupes bactériens dans le SLE.

La dysbiose intestinale a été associée à plusieurs maladies à médiation immunitaire, y compris SLE39 et d'autres maladies auto-immunes32,33,34,35,36,37,38, soulignant un rôle possible du microbiome dans l'équilibre entre les réponses inflammatoires et régulatrices, soit dans le intestinale ou systémique. Par conséquent, comprendre comment le microbiote intestinal façonne les réponses immunitaires semble être essentiel pour la santé humaine, en particulier dans les troubles inflammatoires chroniques tels que les maladies auto-immunes. Cependant, à notre connaissance, il s'agit de la première étude évaluant l'effet du microbiote intestinal isolé à partir d'échantillons de selles de LES sur l'induction de réponses effectrices ou de cellules T régulatrices.

Nos résultats ont révélé que les différences dans la composition du microbiote fécal entre les patients SLE et HC ont suscité différentes réponses immunitaires in vitro. Plus précisément, les DC stimulées avec SLE-M ont favorisé la différenciation Th17 des lymphocytes T CD4 + naïfs dans une plus grande mesure que les DC conditionnées HC-M. Aucune différence n'a été détectée dans la génération de cellules Treg, mais la population CD25high élargie obtenue avec le traitement SLE-M avait tendance à inclure une proportion plus faible de cellules Foxp3 +, ce qui confirme leur statut activé plutôt que régulateur. Par conséquent, le microbiote intestinal modifié du SLE pourrait améliorer l'activation des lymphocytes et la différenciation Th17, entretenant ainsi l'inflammation préexistante.

Ces résultats sont en accord avec les résultats des analyses ex vivo, puisque la fréquence des cellules Th17 a été augmentée dans le sang périphérique frais des patients atteints de LES par rapport aux HC, en particulier chez ceux présentant des anticorps anti-dsDNA, alors qu'aucune différence n'a été observée dans les cellules Treg. . Fait intéressant, les patients atteints de LED présentaient une proportion plus élevée de cellules Foxp3+ productrices d'IL-17, suggérant ainsi un possible processus de trans-différenciation Treg-Th17 qui pourrait être responsable de l'activité régulatrice réduite des cellules Treg rapportée chez les patients atteints de LED18. De même, une prévalence accrue de lymphocytes CD4+ à double expression de l'IL-17 et de Foxp3 circulants, ainsi qu'une réduction de la capacité de suppression des Treg, ont été observées chez les patients atteints de maladies inflammatoires de l'intestin44. La fréquence élevée des cellules Treg présentes dans l'intestin par rapport à d'autres organes45 est remarquable, mais elles ont une plasticité Treg/Th accrue qui pourrait être influencée par des médiateurs inflammatoires, des souches bactériennes spécifiques et d'autres facteurs micro-environnementaux46. Dans cette optique, les analyses du microbiote fécal ont révélé une forte corrélation négative entre la taille des populations IL-17+ Foxp3+, et dans une moindre mesure Th17, et la fréquence des Firmicutes chez les témoins sains, suggérant qu'ils pourraient contrecarrer la différenciation Th17. D'autre part, les taux sériques d'IFNγ, la cytokine Th1 prototypique et légèrement réduite dans le LED, sont corrélés directement chez les patients avec la quantité de Firmicutes et avec le rapport Firmicutes à Bacteroidetes, ce déséquilibre étant la principale caractéristique de la dysbiose du LED et indépendant de la maladie. la durée, le mode de vie et les facteurs liés à l'alimentation39. Par conséquent, nous émettons l'hypothèse que des souches bactériennes appartenant au phylum Firmicutes pourraient être impliquées dans la génération et/ou le maintien de cellules Treg fonctionnelles dans l'intestin, évitant la trans-différenciation en cellules effectrices Th17 dans des conditions physiologiques, alors qu'une proportion diminuée de ces bactéries dans des situations pathologiques peut favoriser le biais Th17 vs Th1 et Treg et générer des cellules IL-17+ Foxp3+. Ainsi, l'enrichissement du microbiote intestinal en bactéries induisant des Treg pourrait être un objectif souhaitable pour les patients atteints de LES. Cependant, bien que le rapport Firmicutes/Bacteroidetes représente la principale différence entre les témoins sains et les patients atteints de LES, les groupes bactériens spécifiques impliqués dans la réponse immunitaire Th17 observée associée au microbiote de LES n'ont pas pu être déterminés par notre approche, d'autant plus que le phyla des Firmicutes comprend à la fois Th1747 et Treg23,41,42,43,44 induisant des bactéries. Par conséquent, la confirmation d'une telle hypothèse bénéficierait d'expériences supplémentaires utilisant des souris sans germes ou des procédures de transplantation de microbiote fécal dans des modèles animaux.

Certains micro-organismes commensaux ont démontré une capacité d'inducteur de Treg, et ont donc été proposés comme souches probiotiques potentielles appropriées pour la modulation d'une réponse inflammatoire excessive afin de restaurer l'homéostasie immunitaire au niveau de la muqueuse intestinale. Ainsi, dans cette étude, nous avons effectué des analyses in vitro visant à déterminer l'effet possible de l'enrichissement du microbiote intestinal du LES avec des souches connues pour être capables de différencier les lymphocytes T naïfs en cellules Treg. Le phylum des Firmicutes contient plusieurs Clostridium spp., appartenant aux clusters IV et XIVa, connus pour induire des cellules Treg23,41,42,43. De même, il a également été démontré que les bifidobactéries favorisent la polarisation des Treg et la réduction des Th17 in vivo en utilisant des modèles murins de colite48. Par conséquent, nous avons utilisé un mélange de deux de ces souches de Clostridia, ainsi qu'une souche de Bifidobacterium avec une capacité in vitro précédemment démontrée à générer des cellules Treg fonctionnelles23,24. De manière inattendue, aucun des deux n'a pu augmenter cette population, mais les résultats ont montré d'autres effets bénéfiques, différents pour chaque traitement bactérien. La supplémentation en SLE-M avec Clostridia a induit une réduction dose-dépendante significative de l'équilibre IL-17/IFNγ, rétablissant ainsi le biais Th1, tandis que l'enrichissement en bifidobactéries a empêché la suractivation des lymphocytes CD4+, détectée par la réduction de l'expression de CD25. Ces effets pourraient cependant être la conséquence d'une suppression active des lymphocytes Th effecteurs. En fait, la régulation à la baisse observée des cellules Th17 peut s'expliquer par une promotion préférentielle des cellules Treg par les souches de Clostridia, conformément aux résultats obtenus par Atarashi et al.43 en utilisant des souris sans germe colonisées par différentes fractions du microbiote humain sain. De même, la fonction suppressive des cellules Treg générées avec la souche de Bifidobacterium utilisée ici entraîne une régulation négative de l'expression de CD25 sur les cellules effectrices23. Par conséquent, au vu de ces résultats et de la dysbiose du LES précédemment rapportée, il semble raisonnable d'envisager l'éventuel bénéfice thérapeutique de la supplémentation en probiotiques contenant des souches inductrices de Treg afin de rétablir l'équilibre Treg/Th17/Th1 chez les patients atteints de LES.

Un autre résultat remarquable est le rôle suggéré joué par Synergistetes, une bactérie intestinale peu connue, dans le LED. Ce groupe bactérien était corrélé négativement avec les Bacteroidetes et positivement avec le rapport Firmicutes/Bacteroidetes chez les témoins sains, alors que chez les patients atteints de LES, une forte corrélation négative a été montrée avec les taux sériques d'IL-6, une cytokine pro-inflammatoire et favorisant le Th17, augmentés chez les patients atteints de LES. De plus, la quantité de Synergistetes avait tendance à être réduite lorsque le titre d'anticorps anti-dsDNA était augmenté, caractéristique du LES. Ces résultats nous ont amenés à évaluer le rôle possible des Synegistetes intestinaux dans le développement de réponses immunitaires humorales protectrices. Les anticorps IgM naturels dirigés contre les bactéries commensales ou les néoantigènes des cellules apoptotiques sont couramment présents dans la circulation humaine dès la naissance et ont des fonctions protectrices et immunorégulatrices. Parmi eux, les anticorps IgM qui reconnaissent la phosphorylcholine (PC) sont des composants précieux du système immunitaire connus pour augmenter la phagocytose des cellules apoptotiques et inhiber les voies inflammatoires dans l'auto-immunité et l'athérosclérose20,22,49. Cependant, les IgG anti-PC ne semblaient pas posséder ces effets protecteurs. Les résultats de notre cohorte SLE ont révélé que la proportion de Synergistetes était positivement corrélée avec les IgM totales et anti-PC et le rapport IgM/IgG chez les patients atteints de SLE, alors que les taux sériques d'IL-6 présentaient des associations opposées. Ces données suggèrent un rôle protecteur des Synergistetes intestinaux favorisant la génération d'anticorps IgM naturels, ce qui pourrait être entravé chez les patients atteints de LES, en particulier ceux présentant des taux élevés d'IL-6. Fait intéressant, il a été rapporté que les anticorps IgM anti-PC peuvent contrecarrer la régulation à la hausse de l'IL-6 in vitro et in vivo22, probablement par l'inhibition des réponses MAPK aux agonistes du TLR, y compris les complexes immuns lupiques50, expliquant ainsi les associations opposées de ces anticorps naturels avec Synergistetes et IL-6. De plus, les cellules B1 et les anticorps anti-PC sont augmentés chez les souris knock-out pour l'IL-6 alors que l'inverse se produit avec les cellules B2 et les taux d'IgG51. Conformément à ces résultats, le titre anti-dsDNA était corrélé négativement avec les niveaux d'anti-PC, soutenant ainsi un effet délétère de l'activité de la maladie sur la quantité d'anticorps protecteurs naturels. En fait, des niveaux plus élevés d'IgM anti-PC ont été associés à une activité réduite de la maladie de SLE20. Malheureusement, les patients actifs n'ont pas été inclus dans notre étude du microbiote intestinal pour éviter les interférences avec les traitements, donc aucune association significative n'a été détectée entre le score SLEDAI et les Synergistetes ou les anticorps IgM anti-PC.

L'implication de Synergistetes dans la promotion des anticorps naturels, et en particulier ceux ayant un rôle athéroscléreux, pourrait être cliniquement pertinente pour les patients atteints de LED et d'autres maladies auto-immunes, car ils développent généralement une athérosclérose prématurée et ont un risque cardiovasculaire accru non expliqué par des facteurs classiques. . Il a été rapporté qu'une diminution des taux d'anticorps IgM anti-PC chez les patients atteints de LED pourrait prédire une maladie cardiovasculaire subclinique21. De plus, les patients ayant subi un événement cardiovasculaire présentaient des niveaux significativement plus faibles de ces anticorps par rapport au reste des patients21,49. En fait, la thérapie basée sur le transfert passif d'anti-PC a été utilisée pour inhiber le développement de l'athérosclérose52. Par conséquent, l'identification de micro-organismes intestinaux capables d'étendre les réponses humorales naturelles grâce à la promotion d'anticorps IgM protecteurs, comme peuvent l'être les Synergistetes, pourrait être un outil précieux pour concevoir des interventions cliniques afin d'améliorer à la fois l'activité de la maladie et la prévention des complications cardiovasculaires. En ce sens, l'analyse des Synergistetes fécaux chez les patients atteints de LES avec et sans événements cardiovasculaires devrait être intéressante.

En résumé, nos cultures in vitro avec du microbiote fécal isolé de patients atteints de LES ont suggéré que les réponses immunitaires contre les bactéries intestinales pourraient être impliquées dans la suractivation des lymphocytes ainsi que dans la trans-différenciation des Treg-Th17 observée chez les patients atteints de LES, avec la réduction des Firmicutes. au rapport Bacteroidetes ayant probablement un rôle dans ce processus. Les réponses immunitaires altérées associées à la dysbiose intestinale pourraient être rétablies, au moins en partie, par la supplémentation avec des souches bactériennes bénéfiques capables d'induire des réponses suppressives. De plus, nos résultats ont révélé un rôle possible des Synergistetes intestinaux dans le développement d'anticorps IgM anti-PC protecteurs naturels. Cela pourrait être particulièrement pertinent chez les patients présentant des niveaux élevés d'IL-6 et/ou d'anti-dsDNA, car ils présentent une faible fréquence de ces bactéries.

L'approbation éthique de cette étude a été obtenue du Comité de bioéthique du CSIC (Consejo Superior de Investigaciones Científicas) et du Comité régional d'éthique pour la recherche clinique (Servicio de Salud del Principado de Asturias), conformément à la Déclaration d'Helsinki. Toutes les méthodes ont été réalisées conformément aux directives approuvées et un consentement écrit éclairé signé a été recueilli auprès de tous les participants avant leur participation à l'étude.

Des cellules mononucléaires du sang périphérique humain (PBMC) ont été obtenues à partir de préparations standard de buffy-coat de 7 donneurs de sang sains (Asturian Blood Transfusion Center, Oviedo, Espagne) par centrifugation sur des gradients de Ficoll-Hypaque (Lymphoprep, Nycomed, Oslo, Norvège). Les monocytes (CD14+ ≥ 95 %) ont été isolés à partir de PBMC précédemment obtenus par sélection négative à l'aide du kit d'enrichissement de monocytes humains (EasySep, Stem Cell Technologies, Canada).

Les DC immatures ont été obtenues à partir de monocytes isolés par des procédures standard. Ainsi, les monocytes ont été cultivés dans des plaques de 24 puits à 5 × 105 cellules/ml pendant 7 jours à 37 °C et 5 % de CO2 dans du milieu RPMI complet (RPMIc) [RPMI 1640 contenant 2 mML-glutamine et 25 mM Hepes (Bio Whitaker, Verviers, Belgique), additionné de 10 % de sérum de veau fœtal (FCS) inactivé par la chaleur et des antibiotiques streptomycine et ampicilline à 100 mg/ml] en présence d'IL-4 humaine recombinante (rh) (35 ng/ml) et de rhGM -CSF (70 ng/ml) (R&D Systems, Abingdon, Royaume-Uni). Aux jours 2 et 5, 0,5 ml du milieu a été retiré sans perturber les amas de CD en développement et 0,5 ml de milieu contenant du GM-CSF et de l'IL-4 fraîchement préparé a été ajouté aux puits, rétablissant le volume final dans chaque puits. à 1 ml. Au jour 7, les CD immatures ont été récupérées, lavées et remises en suspension dans du milieu RPMIc à 5 × 105 cellules/ml pour une maturation ultérieure.

Des DC immatures dérivées de monocytes ont été cultivées dans un milieu RPMIc avec 1 mg/ml de LPS d'E. rapport de 1:10. À cette fin, un microbiote fécal (M) regroupé isolé de quatre témoins sains (HC-M) ou de cinq patients atteints de LED (SLE-M), précédemment montrés comme représentatifs des deux conditions par des études de métagénomique39, a été préparé et utilisé dans DC des cultures. Aussi, les SLE-M ont été enrichis avec différentes proportions de Bifidobacterium bifidum LMG13195 (Bb), une souche connue pour induire l'expression de Foxp323,41, ou avec un mélange de deux souches de Clostridia (Cl : Ruminococcus obeum DSM25238 et Blautia coccoides DSM935, ratio 1 : 1), qui ont un effet putatif inducteur de Treg42,43. Ainsi, 5, 10 ou 15 % de SLE-M ont été remplacés par les mêmes proportions de Bb ou de Cl et utilisés pour la stimulation des DC. Des cultures avec des préparations bactériennes Bb et Cl ont été réalisées comme témoins. Après 48 heures, les DC des 11 traitements différents ont été récoltées, le phénotype mature testé et utilisé pour stimuler les lymphocytes T CD4+ naïfs.

Les cellules T CD4 + ont été isolées des PBMC par sélection négative à l'aide du kit d'enrichissement des cellules T CD4 + humaines (EasySep), en suivant les instructions du fabricant, puis les cellules T CD45RA + naïves ont été séparées après épuisement des cellules CD45RO + (Miltenyi Biotec, Allemagne). Des DC dérivées de monocytes et maturées avec du LPS ou avec les différentes préparations bactériennes ont été co-cultivées avec des lymphocytes T CD4+ CD45RA+ purifiés dans des plaques à 48 puits à un rapport DC:T cell de 1:10. Aux jours 5 et 8, les cellules incubées avec tous les traitements ont été développées avec de l'IL-2 (30 U). Après 12 jours, les cellules ont été collectées et lavées deux fois avant analyse du phénotype Treg/Th17/Th1 par cytométrie en flux.

Bifidobacterium bifidum LMG13195 a été cultivé dans un bouillon de MRS (Difco, Detroit, MI) additionné de 0,05 % (p/v) de L-cystéine (Sigma). Ruminococcus obeum DSM25238 et Blautia coccoides DSM935 ont été cultivés dans une combinaison de bouillon clostridien renforcé (Merck, Darmstadt, Allemagne) et d'infusion cerveau-cœur (Difco), additionnée de 5 % (v/v) de FCS inactivé par la chaleur (LabClinics, Barcelone, Espagne). Les cultures ont été cultivées à 37 ° C dans une chambre anaérobie MG500 (Don Whitley Scientific, West Yorkshire, Royaume-Uni) avec une atmosphère de 10% (v/v) H2, 10% CO2 et 80% N2. Les cultures ont été récoltées par centrifugation, lavées trois fois dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et remises en suspension dans le même tampon à une concentration de 108 bactéries/ml. Les bactéries ont été comptées en utilisant une chambre de comptage de cellules Thoma (Marienfeld Superior, Allemagne). Les cellules bactériennes ont été tuées en les exposant à trois cycles consécutifs de 30 minutes sous rayonnement dans une chambre UV (15 W, Selecta, Barcelone, Espagne). Un comptage sur plaque a été réalisé après traitement UV pour corroborer l'absence de bactéries capables de récupérer dans le milieu adéquat. Les suspensions bactériennes tuées par les UV ont été distribuées en aliquotes et stockées à -80 ° C jusqu'à leur utilisation. L'identité des souches a été confirmée par séquençage des régions variables V1 et V2 du gène de l'ARNr 16S à l'aide des amorces plb16 (5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′) et mlb16 (5′-GGCTGCTGCACGTAGTTAG-3′)53.

Une portion d'échantillon de selles de 4 témoins sains et de 5 patients atteints de LES, précédemment utilisée dans une étude métagénomique39, a été soumise à une centrifugation en gradient de densité pour séparer le microbiote du reste de la matière fécale, selon la méthode de Courtois et al.54 . Les matières fécales ont été homogénéisées dans du NaCl stérile à 0, 9% (1: 9; p / v) pendant 1 min dans un homogénéisateur (Stomacher Lab Blender 400, WVR, Barcelone, Espagne). Une solution de Nycodenz® 80 % (p/v) (PROGEN Biotechnik GmbH, Heidelberg, DE) a été préparée dans de l'eau ultra pure et stérilisée à 121 °C pendant 15 min. Un volume de 10,5 ml des échantillons fécaux homogénéisés a été placé au-dessus de 3,5 ml de la solution de Nycodenz® et centrifugé à 10 000 g pendant 40 min à 4 °C. La phase supérieure, contenant les débris solubles, a été jetée et les couches correspondant au microbiote ont été conservées dans de la glace pendant 5 min, afin de permettre la précipitation des débris non solubles, lavées deux fois dans du PBS, et stockées dans le même tampon dans des aliquotes de 1 ml de 108 microorganismes/ml à -80 °C. Le microbiote inactivé aux UV a été obtenu comme décrit dans la section précédente.

Trente-sept patients atteints de LED remplissant au moins quatre critères révisés de l'American College of Rheumatology (ACR) pour la classification du LED55 ont été sélectionnés à partir du registre asturien actualisé du lupus56,57. Les informations sur les caractéristiques cliniques au cours de l'évolution de la maladie ont été obtenues en examinant les antécédents cliniques (tableau 1). Trente-six donneurs de sang sains appariés selon le sexe et l'âge ont été utilisés comme témoins (âge moyen ± ET : 42,56 ans ± 11,39). Au moment du prélèvement, titre anti-dsDNA, SLE disease activity index (SLEDAI) et/ou poids, IMC (indice de masse corporelle) et lipides sanguins [Triglycérides, HDL (lipoprotéines de haute densité), LDL (lipoprotéines de basse densité) et cholestérol total] ont été évalués et des questions précises ont été posées aux patients concernant le traitement reçu au cours des 6 derniers mois.

Une analyse métagénomique du microbiote fécal a été réalisée chez 20 patients atteints de LES non actifs sans traitement antibiotique ou immunosuppresseur au cours des 6 derniers mois et 20 témoins sains appariés selon l'âge, comme décrit précédemment39. L'extraction de l'ADN fécal, le séquençage de l'amplification de l'ARNr 16 S des amplicons basés sur le gène de l'ARNr 16 S et l'analyse du microbiote basée sur la séquence ont été rapportés ailleurs39. Les séquences brutes rapportées dans cet article sont déposées dans le NCBI Short Read Archive (SRA) (numéro d'accès à l'étude : SRP028162).

Des études phénotypiques de cellules cultivées et d'échantillons de sang ont été réalisées après coloration avec l'anticorps monoclonal (mAb) approprié. La maturation des DC cultivées a été vérifiée après coloration pendant 30 min à 4 ° C avec l'isothiocyanate de fluorescéine anti -CD86 (FITC), la phycoérythrine -CD80 (PE), -HLA-DR PE-Cy5, -CD1a FITC mAb, ou avec l'isotype correspondant mAb conjugué non pertinent apparié comme contrôle négatif (tous les mAb ont été fournis par Pharmingen). Pour déterminer le phénotype Treg/Th17/Th1 à la fois dans les cellules cultivées et les échantillons de sang [précédemment lysés avec 2 ml de solution de lyse BD (BD Biosciences, San Diego, CA) pendant 5 minutes et lavés deux fois avec du PBS], les lymphocytes CD4+ ont d'abord été colorés de manière extracellulaire avec anti-CD4 allophycocyanine-Cy7 (APC-Cy7), anti-CD25 FITC et anti-CD127 PE-Cy7mAb ou avec le mAb conjugué correspondant à l'isotype correspondant (tous de eBiosciences, San Diego, CA). Ensuite, les cellules ont été fixées, perméabilisées et colorées de manière intracellulaire avec anti-FOXP3 PE, IFNγ PerCP-Cy5.5 et IL-17 A APC (ensemble de tampons de coloration Foxp3/facteur de transcription ; eBiosciences) ou avec le mAb conjugué correspondant à l'isotype correspondant, suivant les instructions du fabricant. Un minimum de 10 000 lymphocytes CD4+ ont été acquis sur un cytomètre en flux FACSCanto II (BD) et analysés à l'aide du logiciel FlowJo (Tree Star Inc). L'intensité de fluorescence spécifique a été quantifiée comme l'intensité de fluorescence moyenne (MFI) calculée en soustrayant le fond de la coloration de contrôle correspondant à l'isotype de la fluorescence totale.

Des échantillons de sérum de patients SLE et HC ont été prélevés et maintenus à -80 ° C jusqu'à ce que la détermination des cytokines soit effectuée. Les quantités d'IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-17 A, IFNα, VEGF et GM-CSF ont été analysées par Cytometric Bead Arrays Flex Set à l'aide d'un FACS Canto II cytomètre en flux (BD Biosciences). Pour IL-1β, IL-6, IL-10 et IL-12p70, un ensemble flexible de sensibilité améliorée était nécessaire. Des kits ELISA ont été utilisés pour la quantification du TNFα, de la leptine, de la résistine (kit Mini EDK, PeproTech), du BLyS (Human BAFF Instant ELISA, eBioscience) et de l'IFNγ (kit OptEIA, BD) en suivant les instructions du fabricant. Les limites inférieures de détection étaient de 48,4 fg/ml pour l'IL-1β, 1,4 pg/ml pour l'IL-4, 68,4 fg/ml pour l'IL-6, 1,2 pg/ml pour l'IL-8, 13,7 fg/ml pour l'IL-10 , 12,6 fg/ml pour IL-12p70, 0,3 pg/ml pour IL-17 A, 1,25 pg/ml pour IFNα, 4,5 pg/ml pour VEGF, 0,2 pg/ml pour GM-CSF, 3,9 pg/ml pour TNFα, 63 pg/ml pour la leptine, 24 pg/ml pour la résistine, 130 pg/ml pour BLyS et 0,58 pg/ml pour IFNγ.

Les anticorps IgG et IgM dirigés contre la phosphorylcholine (anti-PC) ont été quantifiés dans des échantillons de sérum de patients et de témoins par un test ELISA interne, comme suit. Les puits de microtitrage (Maxisorp, Nunc) ont été recouverts pendant une nuit de phosphorylcholine conjuguée à de l'albumine de sérum bovin (PC-BSA) (Biosearch Technologies, Petaluma) et bloqués avec du PBS 2% BSA pendant 2 heures à 37 ° C. Un pool de sérums de témoins sains a été utilisé comme standard Ac anti-PC. Les échantillons de sérum et le standard anti-PC ont été dilués dans du Tris Buffered Saline (TBS) et incubés pendant 2 heures à température ambiante (TA). Après lavage avec TBS/Tween 20 (0,05 %), les puits ont été incubés pendant 2 heures à température ambiante avec une IgG ou IgM anti-humaine conjuguée à la phosphatase alcaline (Immunostep, Salamanque, Espagne). Enfin, les plaques ont été lavées deux fois et révélées en utilisant du p-nitrophénylphosphate comme substrat. L'absorbance a été déterminée à une longueur d'onde de 405 nm. Les quantités d'unités arbitraires anti-PC sériques ont été calculées pour chaque échantillon selon les courbes standards. De même, les IgG ou IgM totales ont été quantifiées par des techniques ELISA conventionnelles.

Le test de Kolmogorov-Smirnov a été utilisé pour évaluer la distribution normale des données. Les données des expériences in vitro ont été représentées par la moyenne ± SEM et les différences entre les conditions de culture ont été évaluées par le test de Wilcoxon apparié. Les taux sériques de cytokines des patients atteints de LED et des témoins sains ont été exprimés sous forme de valeur médiane (intervalle interquartile) et le test U non paramétrique de Mann-Whitney a été utilisé pour déterminer les différences entre les deux groupes. Les pourcentages de cellules Treg/Th1/Th17 ont été comparés en utilisant le test de Kruskal-Wallis ; lorsqu'un test significatif a été obtenu, des tests post hoc de Dunn ont été effectués pour déterminer les différences statistiques entre les paires de groupes. Les associations des fréquences des groupes microbiens fécaux avec les sous-ensembles de lymphocytes T, les taux sériques de cytokines et les auto-anticorps ont été examinées par le test de corrélation des rangs de Spearman et confirmées par des analyses de régression linéaire multivariée ajustées en fonction du poids, de l'IMC et des lipides sanguins (triglycérides, HDL, LDL et cholestérol total). Le logiciel Prism 5 (GraphPad Software, USA) et le progiciel statistique SPSS 22 (SPSS Inc.) ont été utilisés pour toutes les déterminations, et une valeur de p < 0,05 a été considérée comme significative.

Comment citer cet article : Lopez, P. et al. Les réponses Th17 et les anticorps IgM naturels sont liés à la composition du microbiote intestinal chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé. Sci. Rep. 6, 24072; doi : 10.1038/srep24072 (2016).

SRP028162

Rahman, A. & Isenberg, DA Lupus érythémateux disséminé. N. Engl. J. Med. 358, 929-939 (2008).

Article CAS Google Scholar

Sanz, I. & Lee, FE-H. Cellules B comme cibles thérapeutiques dans le LES. Nat. Rév. Rheumatol. 6, 326–337 (2010).

Article CAS Google Scholar

Zhu, J. & Paul, WE Cellules T CD4+ : destins, fonctions et défauts. Sang 112, 1557-1569 (2008).

Article CAS Google Scholar

Alunno, A. et al. Équilibre entre les cellules T régulatrices et les cellules Th17 dans le lupus érythémateux disséminé : l'ancien et le nouveau. J. Immunol. Rés. 2012, e823085 (2012).

Google Scholar

Ma, J. et al. Le déséquilibre entre les lymphocytes T CD4+ régulateurs et sécréteurs d'IL-17 chez les patients atteints de lupus. Clin. Rhumatol. 29, 1251-1258 (2010).

Article Google Scholar

Talaat, RM, Mohamed, SF, Bassyouni, IH & Raouf, AA Déséquilibre des cytokines Th1/Th2/Th17/Treg chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé (LED) : corrélation avec l'activité de la maladie. Cytokine 72, 146–153 (2015).

Article CAS Google Scholar

Pan, H.-F. et coll. Profils d'expression des gènes liés à la voie Th17 dans le lupus érythémateux disséminé humain. Mol. Biol. Rep. 40, 391–399 (2013).

Article CAS Google Scholar

Qu, N. et al. Rôles essentiels des cytokines liées au T-Helper 17, IL-17, IL-22 et IL-23, dans les maladies inflammatoires. J. Immunol. Rés. 2013, e968549 (2013).

Google Scholar

Chen, XQ et al. L'IL-17A plasmatique est augmentée chez les nouveaux patients atteints de LED et associée à l'activité de la maladie. J.Clin. Immunol. 30, 221-225 (2010).

Article CAS Google Scholar

Crispin, JC et al. Les lymphocytes T doubles négatifs élargis chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé produisent de l'IL-17 et infiltrent les reins. J. Immunol. Baltim. MD 1950 181, 8761–8766 (2008).

Google Scholar

Doreau, A. et al. L'interleukine 17 agit en synergie avec le facteur d'activation des cellules B pour influencer la biologie des cellules B et la physiopathologie du lupus érythémateux disséminé. Nat. Immunol. 10, 778–785 (2009).

Article CAS Google Scholar

Wang, Y. et al. Analyse basée sur la microdissection laser de l'équilibre des cytokines dans les reins de patients atteints de néphrite lupique. Clin. Exp. Immunol. 159, 1–10 (2010).

Article Google Scholar

Shevach, EM Mécanismes de suppression à médiation cellulaire régulatrice foxp3 + T. Immunité 30, 636–645 (2009).

Article CAS Google Scholar

Fontenot, JD, Gavin, MA et Rudensky, AY Foxp3 programment le développement et la fonction des lymphocytes T régulateurs CD4+CD25+. Nat. Immunol. 4, 330–336 (2003).

Article CAS Google Scholar

Feuerer, M., Hill, JA, Mathis, D. & Benoist, C. Cellules T régulatrices Foxp3+ : différenciation, spécification, sous-phénotypes. Nat. Immunol. 10, 689–695 (2009).

Article CAS Google Scholar

Lyssuk, EY, Torgashina, AV, Soloviev, SK, Nassonov, EL & Bykovskaia, SN Réduction du nombre et de la fonction des cellules T régulatrices CD4 + CD25highFoxP3 + chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé. Adv. Exp. Méd. Biol. 601, 113–119 (2007).

Article Google Scholar

Valencia, X., Yarboro, C., Illei, G. & Lipsky, PE Fonction cellulaire régulatrice CD4 + CD25high T déficiente chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé actif. J. Immunol. 178, 2579-2588 (2007).

Article CAS Google Scholar

Gomez, J., Prado, C., Lopez, P., Suarez, A. & Gutierrez, C. Effet anti-prolifératif conservé et faible inhibition de la sécrétion de TNFalpha par les cellules T régulatrices CD4 + CD25 + chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé. Clin. Immunol. Orlando Floride 132, 385–392.

Article Google Scholar

Round, JL & Mazmanian, SK Le microbiote intestinal façonne les réponses immunitaires intestinales pendant la santé et la maladie. Nat. Rév. Immunol. 9, 313–323 (2009).

Article CAS Google Scholar

Grönwall, C. & Silverman, GJ Natural IgM : auto-anticorps bénéfiques pour le contrôle des maladies inflammatoires et auto-immunes. J.Clin. Immunol. 34 Suppl 1, S12–21 (2014).

Article Google Scholar

Grönwall, C. et al. Relation entre la plaque carotidienne et les anticorps IgM naturels chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé. Clin. Immunol. 153, 1–7 (2014).

Article Google Scholar

Chen, Y., Park, Y.-B., Patel, E. & Silverman, GJ Les anticorps IgM contre les déterminants associés à l'apoptose recrutent C1q et améliorent la phagocytose des cellules dendritiques des cellules apoptotiques. J. Immunol. 182, 6031–6043 (2009).

Article CAS Google Scholar

Lopez, P., Gonzalez-Rodriguez, I., Gueimonde, M., Margolles, A. & Suárez, A. La réponse immunitaire aux souches de Bifidobacterium bifidum soutient la plasticité Treg/Th17. PloS One 6, e24776 (2011).

Annonces d'article Google Scholar

López, P., Gueimonde, M., Margolles, A. & Suárez, A. Des souches distinctes de Bifidobacterium entraînent différentes réponses immunitaires in vitro. Int. J. Microbiol Alimentaire. 138, 157-165 (2010).

Article Google Scholar

Rescigno, M. et al. Les cellules dendritiques expriment des protéines de jonction serrées et pénètrent dans les monocouches épithéliales intestinales pour prélever des bactéries. Nat. Immunol. 2, 361–367 (2001).

Article CAS Google Scholar

Joffre, O., Nolte, MA & Spörri, R. & Reis e Sousa, C. Signaux inflammatoires dans l'activation des cellules dendritiques et l'induction de l'immunité adaptative. Immunol. Rév. 227, 234–247 (2009).

Article CAS Google Scholar

Mazmanian, SK, Round, JL & Kasper, DL Un facteur de symbiose microbienne prévient les maladies inflammatoires intestinales. Nature 453, 620–625 (2008).

Article ADS CAS Google Scholar

Ivanov, II et al. Des microbiotes spécifiques dirigent la différenciation des cellules T auxiliaires productrices d'IL-17 dans la muqueuse de l'intestin grêle. Microbe hôte cellulaire 4, 337–349 (2008).

Article CAS Google Scholar

Gaboriau-Routhiau, V. et al. Le rôle clé des bactéries filamenteuses segmentées dans la maturation coordonnée des réponses des lymphocytes T auxiliaires intestinaux. Immunité 31, 677–689 (2009).

Article CAS Google Scholar

Yurkovetskiy, L. et al. Les préjugés sexistes dans l'auto-immunité sont influencés par le microbiote. Immunité 39, 400–412 (2013).

Article CAS Google Scholar

Markle, JGM et al. Différences entre les sexes dans la régulation hormono-dépendante de l'auto-immunité par le microbiome intestinal. Sciences 339, 1084-1088 (2013).

Article ADS CAS Google Scholar

Garrett, WS et al. Les entérobactéries agissent de concert avec le microbiote intestinal pour induire des colites spontanées et transmises par la mère. Microbe hôte cellulaire 8, 292–300 (2010).

Article CAS Google Scholar

Franck, DN et al. Caractérisation moléculaire-phylogénétique des déséquilibres de la communauté microbienne dans les maladies intestinales inflammatoires humaines. Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 13780–13785 (2007).

Article ADS CAS Google Scholar

Yeoh, N., Burton, JP, Suppiah, P., Reid, G. & Stebbings, S. Le rôle du microbiome dans les maladies rhumatismales. Courant. Rhumatol. Rep. 15, 314 (2013).

Article Google Scholar

Wen, L. et al. Immunité innée et microbiote intestinal dans le développement du diabète de type 1. Nature 455, 1109-1113 (2008).

Article ADS CAS Google Scholar

Lee, YK, Menezes, JS, Umesaki, Y. & Mazmanian, SK Les réponses pro-inflammatoires des lymphocytes T au microbiote intestinal favorisent l'encéphalomyélite auto-immune expérimentale. Proc. Natl. Acad. Sci. 108, 4615–4622 (2011).

Article ADS CAS Google Scholar

Larsen, N. et al. Le microbiote intestinal chez les adultes humains atteints de diabète de type 2 diffère des adultes non diabétiques. PLoS ONE 5, e9085 (2010).

Annonces d'article Google Scholar

Man, SM, Kaakoush, NO & Mitchell, HM Le rôle des bactéries et des récepteurs de reconnaissance de formes dans la maladie de Crohn. Nat. Rév. Gastroenterol. Hépatol. 8, 152-168 (2011).

Article Google Scholar

Hevia, A. et al. Dysbiose intestinale associée au lupus érythémateux disséminé. mBio 5, e01548–01514 (2014).

Article CAS Google Scholar

Turnbaugh, PJ et al. Un microbiome intestinal associé à l'obésité avec une capacité accrue de récolte d'énergie. Nature 444, 1027-1031 (2006).

Annonces d'article Google Scholar

Lopez, P. et al. L'interaction de Bifidobacterium bifidum LMG13195 avec les cellules HT29 influence l'expression des récepteurs de chimiokines associés aux lymphocytes T régulateurs. Appl. Environ. Microbiol. 78, 2850–2857 (2012).

Article Google Scholar

Atarashi, K. et al. Induction de cellules T régulatrices du côlon par des espèces indigènes de Clostridium. Sciences 331, 337-341 (2011).

Article ADS CAS Google Scholar

Atarashi, K. et al. Induction de Treg par un mélange rationnellement sélectionné de souches de Clostridia issues du microbiote humain. Nature 500, 232-236 (2013).

Article ADS CAS Google Scholar

Ueno, A. et al. La prévalence accrue de la nouvelle IL-17 circulante sécrétant Foxp3 exprimant les lymphocytes T CD4 + et la fonction suppressive défectueuse des cellules régulatrices Foxp3 + circulantes favorisent la plasticité entre Th17 et les lymphocytes T régulateurs chez les patients atteints de maladies inflammatoires de l'intestin. Inflamm. Intestin Dis. 19, 2522-2534 (2013).

Article Google Scholar

Hall, JA et al. L'ADN commensal limite la conversion des lymphocytes T régulateurs et est un adjuvant naturel des réponses immunitaires intestinales. Immunité 29, 637–649 (2008).

Article CAS Google Scholar

Murai, M., Krause, P., Cheroutre, H. & Kronenberg, M. Stabilité et plasticité des lymphocytes T régulateurs dans les systèmes immunitaires muqueux et systémiques. Immunol Muqueux. 3, 443–449 (2010).

Article CAS Google Scholar

Farkas, AM et al. Induction de cellules Th17 par des bactéries filamenteuses segmentées dans l'intestin murin. J. Immunol. Méthodes 421, 104–111 (2015).

Article CAS Google Scholar

Zheng, B. et al. Bifidobacterium breve atténue la colite induite par le sulfate de sodium dextran murin et augmente les réponses des cellules T régulatrices. PloS One 9, e95441 (2014).

Annonces d'article Google Scholar

Grönwall, C. et al. La MAPK phosphatase-1 est nécessaire pour l'inhibition médiée par les auto-anticorps naturels régulateurs des réponses TLR. Proc. Natl. Acad. Sci. États-Unis 109, 19745–19750 (2012).

Annonces d'article Google Scholar

Bao, S., Mari, AJ & Beagley, KW B1 Le nombre de cellules B et les anticorps contre la phosphorylcholine et le LPS sont augmentés chez les souris knock-out pour le gène IL-6. Cellule. Immunol. 198, 139–142 (1999).

Article CAS Google Scholar

Su, J. et al. Anticorps naturels contre la phosphorylcholine comme facteurs protecteurs potentiels dans le LES. Rhumatologie 47, 1144–1150 (2008).

Article CAS Google Scholar

Faria-Neto, JR et al. L'immunisation passive avec des anticorps monoclonaux IgM dirigés contre la phosphorylcholine réduit l'athérosclérose accélérée du greffon veineux chez les souris nulles pour l'apolipoprotéine E. Athérosclérose 189, 83–90 (2006).

Article CAS Google Scholar

Milani, C. et al. Évaluation du microbiote fécal : un protocole d'analyse basé sur les gènes de l'ARNr 16S Torrent ionique optimisé. PLoS ONE 8, e68739 (2013).

Article ADS CAS Google Scholar

Courtois, S. et al. Quantification de sous-groupes bactériens dans le sol : comparaison d'ADN extrait directement du sol ou de cellules préalablement libérées par centrifugation en gradient de densité. Environ. Microbiol. 3, 431–439 (2001).

Article CAS Google Scholar

Arnett, FC et al. L'American Rheumatism Association a révisé en 1987 les critères de classification de la polyarthrite rhumatoïde. Arthrite Rheum. 31, 315–324 (1988).

Article CAS Google Scholar

Gomez, J. et al. Lupus érythémateux disséminé dans les Asturies, Espagne : caractéristiques cliniques et sérologiques. Médecine (Baltimore) 85, 157–168 (2006).

Article Google Scholar

López, P., Mozo, L., Gutierrez, C. & Suárez, A. Épidémiologie du lupus érythémateux disséminé dans une population du nord de l'Espagne : influence du sexe et de l'âge sur les caractéristiques immunologiques. Lupus 12, 860–865 (2003).

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Ce travail a été soutenu par les fonds FEDER de l'Union européenne, le Fondo de Investigación Sanitaria (PI12/00523), le Plan national espagnol de R&D (AGL2010-14952 et AGL2013-44039-R) et la Fondation pour la promotion de la recherche scientifique appliquée dans les Asturies et la technologie (EQUIP09 -19). JR-C. est récipiendaire d'une bourse FPU du ministère espagnol de l'Éducation, de la Culture et des Sports. BJ et AH sont respectivement récipiendaires d'un contrat postdoctoral Ramón y Cajal et d'une bourse FPI du ministère espagnol de l'Économie et de la Compétitivité. Nous remercions les patients SLE et l'ALAS (Asociación Lúpicos de Asturias) pour leurs encouragements continus.

Département de biologie fonctionnelle, domaine d'immunologie, Faculté de médecine, Université d'Oviedo, Oviedo, Asturies, Espagne

Patricia Lopez, Fléaux de la paix, Javier Rodriguez-Carrio et Ana Suarez

Département de microbiologie et biochimie des produits laitiers, Institut des produits laitiers des Asturies (IPLA), Conseil supérieur de la recherche scientifique (CSIC), Villaviciosa, Asturies, Espagne

Banesa of Peace, Heavy Spider, Borja Sanchez & Abelardo Margolles

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PL a participé à la conduite de l'étude, à la collecte d'échantillons, à l'examen des manifestations cliniques, à l'activité de la maladie et à la thérapie des patients, aux procédures expérimentales, à l'analyse/interprétation des données et à la préparation du manuscrit. BP et JR-C. effectué certaines procédures expérimentales et l'analyse des données. BS, AH et AM ont participé à l'étude de conception, aux expériences et à l'analyse liées au microbiote. AS a contribué à la conception/conduite de l'étude, à l'interprétation des données et à la préparation du manuscrit.

Correspondance à Abelardo Margolles.

Les auteurs déclarent une absence d'intérêts financiers en compétition.

Ce travail est sous licence internationale Creative Commons Attribution 4.0. Les images ou tout autre matériel tiers dans cet article sont inclus dans la licence Creative Commons de l'article, sauf indication contraire dans la ligne de crédit ; si le matériel n'est pas inclus dans la licence Creative Commons, les utilisateurs devront obtenir l'autorisation du titulaire de la licence pour reproduire le matériel. Pour voir une copie de cette licence, visitez http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Réimpressions et autorisations

Lopez, P., de Peace, B., Rodriguez-Carrio, J. et al. Les réponses Th17 et les anticorps IgM naturels sont liés à la composition du microbiote intestinal chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé. Sci Rep 6, 24072 (2016). https://doi.org/10.1038/srep24072

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Reçu : 14 septembre 2015

Accepté : 18 mars 2016

Publié: 05 avril 2016

DOI : https://doi.org/10.1038/srep24072

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