Identification de biomarqueurs diagnostiques non invasifs pour la grossesse extra-utérine à l'aide de données

Rapports scientifiques volume 12, Numéro d'article : 19992 (2022) Citer cet article

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À l'heure actuelle, le diagnostic de grossesse extra-utérine repose principalement sur l'échographie transvaginale et la β-hCG. Cependant, ces méthodes peuvent retarder le diagnostic et le temps de traitement. Par conséquent, nous avons cherché à dépister les marqueurs moléculaires sérologiques pour le diagnostic précoce de la grossesse extra-utérine (EP). En utilisant la protéomique d'acquisition indépendante des données (DIA), les protéines différentielles dans le sérum ont été sélectionnées entre les groupes grossesse intra-utérine (IP) et EP. Ensuite, les niveaux d'expression de ces protéines différentielles ont été mesurés par dosage immuno-enzymatique. La valeur diagnostique des biomarqueurs sériques a été évaluée par l'analyse de la courbe caractéristique de fonctionnement du récepteur. GSTO1, ECM-1 et β-hCG ont montré des différences significatives entre les groupes EP et IP (P < 0,05). La combinaison GSTO1/ECM-1/β-hCG avait une aire sous la courbe de 0,93 (IC à 95 % 0,88–0,99), une sensibilité de 88,89 % (IC à 95 % 73,94–96,89) et une spécificité de 86,11 % (95 % IC 70,50–95,33) avec un rapport de vraisemblance de 6,40. La combinaison de GSTO1/ECM-1/β-hCG peut être développée en une approche possible pour le diagnostic précoce de la PE.

La grossesse extra-utérine (PE) est définie comme une grossesse qui se produit en dehors de l'utérus, le plus souvent dans une trompe de Fallope, elle peut également se produire dans un ovaire, la cavité abdominale et une corne utérine1. La prévalence de la grossesse extra-utérine est estimée à 2% de toutes les grossesses, est une cause importante de mortalité chez les femmes enceintes2. A l'heure actuelle, elle représente encore 6 % des morbidités liées à la grossesse3. Les symptômes typiques d'une grossesse extra-utérine sont l'arrêt des menstruations, des douleurs abdominales soudaines et des saignements vaginaux4. Dans les cas graves, une syncope, un choc et même la mort peuvent survenir4. Par conséquent, le diagnostic et le traitement précoce de la grossesse extra-utérine sont particulièrement importants. À l'heure actuelle, le diagnostic de grossesse extra-utérine repose principalement sur l'échographie transvaginale et la mesure quantitative de la sous-unité β de la gonadotrophine chorionique humaine (β-hCG)5. Cependant, en pratique, une patiente ne se rend chez le médecin qu'après des douleurs abdominales et des saignements vaginaux, ce qui retarde facilement le diagnostic et le temps de traitement. De plus, les méthodes de diagnostic actuelles doivent être effectuées à l'hôpital, nous voulons développer une méthode de dépistage précoce des grossesses extra-utérines qui peut être utilisée à la maison, afin de réduire considérablement les dommages de la grossesse extra-utérine. Par conséquent, une alerte précoce et un meilleur diagnostic de les grossesses extra-utérines sont des problèmes urgents.

Au cours des 20 dernières années, les chercheurs ont recherché des marqueurs sérologiques de la grossesse extra-utérine, mais peu de progrès ont été réalisés jusqu'à présent en raison de diverses difficultés. À l'heure actuelle, la β-hCG reste le marqueur sérique le plus largement utilisé en pratique clinique, mais un seul taux sérique de β-hCG ne peut refléter qu'une grossesse, mais pas le lieu de la grossesse. Par conséquent, la β-hCG sérique ne convient pas au diagnostic de grossesse extra-utérine.

Pour mieux diagnostiquer la grossesse extra-utérine, plusieurs études ont été menées et plusieurs indicateurs ont été identifiés, tels que la progestérone, le VEGF, l'inhibine A, l'activine A, ou une combinaison de progestérone, β-hCG, CA125 et des pourcentages de lymphocytes T CD3 +6 . En 2007, Florio et al. ont d'abord rapporté que l'activine A pouvait être utilisée pour prédire une grossesse extra-utérine7. Lorsque la limite de détection était fixée à 0,37 ng/mL, la sensibilité et la spécificité étaient respectivement de 100 % et 99,6 %. Cependant, le résultat n'a pas été confirmé dans les études de confirmation ultérieures. Yan et al. ont rapporté que la sensibilité et la spécificité de l'adrénomédulline (ADM) dans la détection de la grossesse extra-utérine n'étaient que de 53,50 % et 85,00 %, respectivement8. Cependant, la praticabilité de ces facteurs est limitée en raison de résultats contradictoires ou d'une faible sensibilité et spécificité.

L'acquisition indépendante des données (DIA) est une technique de protéomique quantitative émergente permettant un profilage rapide et sensible des protéines à partir de mélanges complexes. Cette détection fournit une identification et une quantification sans ambiguïté de tous les lipides (pics abondants faibles et élevés). L'utilisation de nouvelles fonctions de numérisation et de flux de travail de traitement de données DIA représente un changement de paradigme dans les attentes associées à l'analyse protéomique quantitative9. Le but de cette étude était de dépister les marqueurs moléculaires sérologiques de la grossesse extra-utérine avec l'application de la protéomique quantitative basée sur l'acquisition indépendante des données (DIA).

Dans cette étude, nous avons recruté 36 femmes avec une grossesse extra-utérine et 36 femmes avec une grossesse précoce normale comme témoins après évaluation clinique, β-hCG et échographie vaginale. Les informations démographiques et les caractéristiques cliniques sont présentées dans le tableau 1. Les issues de grossesse comprenaient 36 (50,0 %) IP viables et 36 (50,0 %) EP. Vingt-sept PE (75,0 %) ont été placés dans des trompes de Fallope et neuf (25,0 %) ont été placés dans des incisions utérines. Les deux groupes de femmes étaient aux premiers stades de la grossesse et aucune différence significative n'a été observée en termes d'âge et d'âge gestationnel (P > 0,05), qui a été déterminé par le premier jour de la dernière période menstruelle. De plus, les taux de β-hCG étaient mesurables dans tous les échantillons et étaient significativement (P < 0,001) plus faibles dans le groupe EP que dans le groupe IP (Tableau 1).

Les biomarqueurs potentiels dans les échantillons de sérum pour évaluer l'activité ont été criblés à l'aide de la protéomique d'acquisition indépendante des données (DIA). Comme le montre la figure 1, dans les 5 échantillons évalués, chaque échantillon a plusieurs points positifs. Les intensités de TSP1, GSTO1, INHBC, CLEC3B et ECM-1 dans les échantillons de sérum du groupe EP étaient significativement différentes de celles du groupe IP. Ces résultats indiquent que ces marqueurs sérologiques peuvent être des cibles utiles pour le diagnostic de la PE.

Volcano plot (A) et Cluster heatmap (B) des protéines différentiellement exprimées entre les groupes IP et EP.

L'expression de TSP1, GSTO1, INHBC, CLEC3B, ECM-1 et β-hCG dans le sérum a été mesurée par ELISA (n = 36). Comme le montre la figure 2, les niveaux d'expression de GSTO1 étaient significativement plus élevés chez les patientes atteintes d'EP que chez les patientes ayant une grossesse normale (P = 0,01). Bien que CLEC3B n'ait montré aucune différence entre EP et IP, le niveau d'expression de CLEC3B dans TEP a diminué de manière significative (P = 0, 04). Fait intéressant, les concentrations d'ECM-1 dans EP et TEP étaient significativement inférieures à celles de IP ( P <0, 001). Les niveaux de β-hCG étaient significativement plus faibles dans les grossesses EP et TEP que dans les grossesses normales (P < 0,001). Il n'y avait pas de différence statistiquement significative dans TSP1, INHBC ou CLEC3B entre les trois groupes.

Concentrations de TSP1, GSTO1, INHBC, CLEC3B, ECM-1 et β-hCG dans le sérum des femmes IP et EP. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± écart type.

L'analyse en sous-groupe selon l'âge gestationnel (< 50 vs ≥ 51 jours) a montré que les taux de GSTO1 étaient significativement plus élevés chez les patients avec EP dont l'âge gestationnel ≥ 51 jours par rapport aux patients avec IP dont l'âge gestationnel ≥ 51 jours (P = 0,01) et patients avec EP dont l'âge gestationnel < 50 jours (P = 0,02). Les concentrations d'ECM-1 chez les patientes EP dont l'âge gestationnel était < 50 jours étaient significativement inférieures à celles des patientes IP (P = 0,01). Les mêmes niveaux inférieurs d'ECM-1 ont également été observés chez les patients EP dont l'âge gestationnel était ≥ 51 jours (P < 0,001). De plus, les concentrations de β-hCG des patientes EP dont l'âge gestationnel ≥ 51 jours étaient inférieures à celles des patientes IP dont l'âge gestationnel ≥ 51 jours (P = 0,001) (Fig. 3).

Analyse en sous-groupe des concentrations de TSP1, GSTO1, INHBC, CLEC3B, ECM-1 et β-hCG dans le sérum des femmes IP et EP selon l'âge gestationnel (< 50 vs 51 jours). Les données sont présentées sous forme de moyenne ± écart type.

La courbe ROC a été utilisée pour évaluer la sensibilité/spécificité, la valeur prédictive positive/négative, le rapport de vraisemblance (LR) et l'aire sous la courbe (AUC) de GSTO1, INHBC, β-hCG et différentes combinaisons comme tests de diagnostic. Le tableau 2 et la figure 4 démontrent la capacité discriminatoire significative de l'augmentation de GSTO1, ECM-1, β-hCG et différents niveaux de combinaison pour le diagnostic de la PE.

Courbes caractéristiques de fonctionnement du récepteur de GSTO1, ECM-1 et β-hCG.

En détail, GSTO1 au seuil de 4 343 pg/mL a atteint une sensibilité de 63,89 % (intervalle de confiance (IC) à 95 %, 46,22 à 79,18) et une spécificité de 69,44 % (IC à 95 %, 51,89 à 83,65) en tant que sérum unique marqueur pour la prédiction de la PE (AUC : 0,70 (IC à 95 %, 0,58 à 0,82)), avec un RV de 2,09. Lorsqu'une concentration d'ECM-1 de 4 732 pg/mL a été utilisée comme seuil pour le diagnostic de PE dans le groupe témoin, la sensibilité était de 72,22 % (IC à 95 %, 54,81 à 85,80), la spécificité était de 75,00 % (IC à 95 % , 57,80–87,88) comme marqueur sérique unique pour la prédiction de la PE (ASC : 0,82 (IC à 95 %, 0,72–0,91)) et le RV était de 2,89. La β-hCG au seuil de 24 300 mUI/mL a atteint une sensibilité de 80,56 % (IC à 95 %, 63,98 à 91,81) et une spécificité de 77,78 % (IC à 95 %, 60,85 à 89,88). L'ASC de la β-hCG était de 0,83 (IC à 95 % : 0,74–0,93), avec un RV de 3,63. En combinant tous les facteurs ensemble, nous avons construit la formule y = (0,0003*GSTO1)-(0,001*ECM1)-(0,00003*hCG) + 3,518. La détection combinée de ces trois marqueurs sérologiques avait une ASC de 0,93 (IC à 95 %, 0,88-0,99), une sensibilité de 88,89 % (IC à 95 %, 73,94-96,89) et une spécificité de 86,11 % (IC à 95 %, 70,50- 95,33) avec un LR de 6,40.

Étant donné que le diagnostic de la grossesse extra-utérine est un défi clinique au début de la grossesse, la recherche d'un biomarqueur pour simplifier et améliorer le diagnostic de la grossesse extra-utérine est un axe de recherche. Certaines études ont démontré qu'il n'existe pas de biomarqueur diagnostique unique pour la grossesse extra-utérine tubaire qui a été suffisamment testé et donne des résultats satisfaisants10. L'analyse de plusieurs marqueurs sériques pourrait être une solution possible pour le diagnostic de la PE. Dans cette étude, nous avons constaté que GSTO1, ECM-1 et β-hCG peuvent être des marqueurs sérologiques pour le diagnostic précoce de la PE, en particulier en combinant les trois facteurs ensemble, avec la meilleure sensibilité et spécificité.

Chaque marqueur que nous choisissons est biologiquement plausible. La glutathion transférase (GST) est une grande famille de transférases qui est liée à la progression des tumeurs et au métabolisme des corps étrangers (tels que les polluants environnementaux)11. Il a été confirmé qu'Omega-GST 1 existe largement dans une variété de tissus et a l'activité d'une variété d'enzymes biologiques, en particulier celles impliquées dans la biotransformation de l'arsenic12,13,14. Certaines études ont montré qu'il existe une relation statistique entre l'avortement récurrent et la mutation GSTO1 pendant la grossesse. Ils ont en outre émis l'hypothèse que cette relation est liée à la modification de l'activité de l'ascorbate réductase et du métabolisme de l'arsenic causée par la mutation GSTO115. Dans une étude de la relation entre la grossesse et GSTO1, GSTO1 s'est également avéré être lié à la restriction de croissance intra-utérine fœtale16,17. Dans cette étude, nous avons constaté que pendant plus de 51 jours de grossesse, les niveaux de GSTO1 dans les groupes IP et EP étaient significativement différents, mais la sensibilité et la spécificité de la différence n'étaient pas élevées.

La protéine de matrice extracellulaire 1 (ECM-1) est une glycoprotéine qui agit généralement comme une protéine centrale de liaison fonctionnelle et interagit avec une variété de protéines pour réguler l'angiogenèse et la croissance tumorale18. Par exemple, l'interaction de l'ECM-1 avec la métalloprotéinase matricielle 9 (MMP9), le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR), CX3CL1 et CCL14 est impliquée dans la survenue et le développement de nombreuses maladies19,20,21. Graubner et al. ont proposé qu'une grande quantité d'ECM1 puisse être observée dans l'épithélium de l'endomètre au début de la grossesse, ce qui peut être lié à la décidualisation et à la préparation de l'implantation22. Au fur et à mesure que la grossesse progresse, la quantité d'ECM-1 change en conséquence, ce qui suggère que l'ECM-1 joue un rôle important dans le maintien de la grossesse et le développement du fœtus23,24. Hannan et al. ont constaté que CX3CL1 et CCL14 favorisent la migration des trophoblastes en début de grossesse en régulant l'ECM-120. Par conséquent, nous avons exploré la relation entre ECM-1 et EP et trouvé une différence significative entre le groupe IP et le groupe EP, suggérant la possibilité d'ECM-1 dans le diagnostic d'EP précoce.

D'autres marqueurs du développement de la grossesse étaient moins significatifs. La thrombospondine-1 (TSP-1) est un indice sensible pour surveiller l'activation plaquettaire in vitro25. Des études ont montré que l'expression de TSP-1 a une certaine relation avec la grossesse et que le niveau d'expression dans différents tissus musculaires est différent à différents stades de la grossesse, ce qui assure la formation normale de vaisseaux sanguins pendant la grossesse et maintient la stabilité du vaisseau sanguin. lit26,27. L'inhibine bêta C (INHBC) appartient à la famille du facteur de croissance transformant bêta (TGF-β), est largement présente dans le placenta et l'endomètre et a un effet anti-prolifération cellulaire28,29,30. Abdoli et al. et Fortes et al. ont souligné que le gène INHBC est impliqué dans l'hérédité des traits reproducteurs des ovins et des bovins31,32, et certains chercheurs ont également souligné que l'INHBC est impliqué dans le processus d'implantation des blastocystes33. Le membre B de la famille 3 du domaine de lectine de type C (CLEC3B) est une protéine de liaison qui a un effet de liaison spécifique sur le plasminogène kringle-434. Rocha et al. ont proposé que le fœtus puisse stimuler la sécrétion de CLEC3B pendant la grossesse, donc CLEC3B a un rôle dans le diagnostic de début de grossesse35. Malheureusement, dans cette étude, nous n'avons pas trouvé de différence significative dans ces trois marqueurs entre le groupe IP et le groupe EP, mais une étude plus approfondie est nécessaire.

En tant qu'indicateur sérologique de PE le plus couramment utilisé, la β-hCG joue un rôle très important dans le diagnostic de grossesse extra-utérine précoce. Souvent, de faibles niveaux de β-hCG peuvent suspecter la possibilité d'EP, mais la β-hCG seule ne confirme ni n'exclut EP, ce qui était cohérent avec nos résultats expérimentaux36,37,38. Bien qu'il y ait eu des différences significatives entre le groupe IP et le groupe EP, la sensibilité et la spécificité de la β-hCG pour le diagnostic de l'EP étaient médiocres, et GSTO-1 et ECM-1 ont montré les mêmes résultats. Cependant, lorsque β-hCG, GSTO-1 et ECM-1 ont été combinés, la sensibilité et la spécificité ont été significativement augmentées, suggérant la possibilité d'un diagnostic précoce de la PE.

En raison du succès limité des mesures de biomarqueurs sériques uniques, plusieurs chercheurs ont commencé à étudier la possibilité d'utiliser plusieurs analyses de marqueurs afin de diagnostiquer une grossesse extra-utérine tubaire. O'Leary et al. ont examiné les taux de progestérone et de β-hCG et ont découvert, dans des études préliminaires, qu'une β-hCG plasmatique < 3 000 UI/l et une progestérone plasmatique < 40 nmol/l pouvaient prédire une grossesse extra-utérine tubaire avec une sensibilité de 88 % et une spécificité de 82 %. %39. Une étude rétrospective a analysé 289 femmes au service des urgences qui ont reçu un diagnostic de PE, d'avortement spontané ou de grossesse intra-utérine viable, et les chercheurs ont recueilli les concentrations sériques de progestérone, d'hCG et d'activine A de ces patientes et ont effectué une analyse statistique40. Leurs résultats suggèrent que les seuils de progestérone (< 10 ng/ml), d'hCG (< 6 699 UI/l) et d'activine A (< 0,26 ng/ml) ont été optimisés par l'analyse ROC, et que le panel multimarqueurs utilisant les trois biomarqueurs avait une sensibilité de 70% et une spécificité de 69%40. Notre étude confirme également ces résultats qui combinent plusieurs marqueurs en un seul test avec un meilleur diagnostic que les protéines individuelles. De plus, les résultats de notre étude étaient similaires à ceux des études ci-dessus en termes de sensibilité et de spécificité.

Il y a des limites à cette expérience. Premièrement, ces résultats sont considérés comme préliminaires et bon nombre des analyses ne sont pas systématiquement utilisées dans la pratique clinique. La validation externe des plans futurs sera effectuée dans un ensemble séparé d'échantillons. Deuxièmement, la taille de notre échantillon est relativement petite, ce qui peut entraîner une déviation des résultats. Il est suggéré d'utiliser un échantillon de plus grande taille dans les recherches futures. De plus, les résultats de diverses protéines dans le groupe IP et le groupe EP ont montré peu de différence, ce qui peut ne pas être appliqué à l'indice d'examen clinique rapide.

En conclusion, la présente étude révèle que GSTO1/ECM-1/β-hCG dans le sérum peuvent être des biomarqueurs potentiellement utiles pour le diagnostic précoce de la PE, ce qui devrait être confirmé dans des études avec des échantillons plus importants. Nous espérons présenter ce résultat de recherche à inspirer les chercheurs ultérieurs dans la conception de la recherche et les idées de recherche.

Dans le groupe EP, les critères d'inclusion comprenaient 4 à 12 semaines de grossesse, des douleurs abdominales, des saignements et d'autres symptômes cliniques, et un diagnostic d'EP confirmé par échographie transvaginale (y compris grossesse tubaire, grossesse avec cicatrice d'incision utérine et grossesse avec corne utérine). Les femmes ayant des antécédents de ménopause et d'augmentation de la β-hCG sérique mais sans diagnostic confirmé par échographie ou amélioration après traitement conservateur ont été exclues. Dans le groupe grossesse intra-utérine (IP), les critères d'inclusion comprenaient 4 à 12 semaines de grossesse, l'absence de douleur abdominale, de saignement ou d'autres symptômes cliniques, et un bourgeon fœtal utérin confirmé par échographie. Les données cliniques ont été enregistrées pour tous les patients, y compris l'âge, l'âge gestationnel, la concentration sérique de β-hCG, la concentration de progestérone et le diagnostic clinique. Cette étude a été approuvée par les comités d'éthique du deuxième hôpital de Chine occidentale de l'Université du Sichuan (n ° 124) tous les patients ont signé des formulaires de consentement éclairé.

2 à 3 ml d'un échantillon de sang veineux périphérique de patients EP et IP ont été prélevés chacun dans des hôpitaux de troisième grade A. Les échantillons ont été centrifugés à 1000 tr/min à 4 °C pendant 10 min, et le sérum a été séparé, conditionné et stocké à -80 °C jusqu'à utilisation. Tous les échantillons ont été sélectionnés à partir d'individus Han non apparentés.

Dix échantillons de sérum (provenant de 5 patients EP et 5 patients IP) ont été utilisés pour effectuer un dépistage protéomique par acquisition indépendante des données (DIA). Tous les échantillons sélectionnés ont été appariés pour l'âge et l'âge gestationnel (voir le tableau supplémentaire 1).

La première étape est l'extraction des échantillons et le contrôle de la qualité. Tout d'abord, 10 ul de sérum de chaque échantillon (contenant des inhibiteurs de la trypsine) ont été ajoutés à la suspension de résine dans la colonne à température ambiante (TA). Après mélange, la colonne a été placée sur le rotateur et mise en rotation pendant 1 h. Deuxièmement, avec le fond et le couvercle retirés, la colonne a été placée dans un tube EP de 2 ml et centrifugée à 1 000 g pendant 2 min à 4 ° C. Troisièmement, après élimination des 12 premières protéines en abondance du plasma, les échantillons élués ont été réservés par lyophilisation sous vide. L'échantillon lyophilisé a été ajouté à 100 ul de SDS pour redissolution, puis centrifugé à 12 000 g pendant 10 min à température ambiante. Le surnageant était la solution de protéines totales, dont la concentration a été déterminée par la méthode de l'acide bicinchoninique (BCA). Enfin, chaque échantillon (8 µg) a été séparé par électrophorèse sur gel de polyacrylamide SDS à 12 % (SDS-PAGE). Après cela, les gels séparés ont été colorés par une coloration au bleu brillant de Coomassie et ensuite lavés avec de l'eau distillée jusqu'à ce que le fond soit clair. Pour le contrôle de la qualité, les gels ont été scannés à l'aide d'ImageScanner, qui a été utilisé pour juger si des expériences de suivi étaient possibles en fonction des images.

La deuxième étape est l'expérience DIA. Tout d'abord, après quantification des protéines, un échantillon de 30 μg a été placé dans un tube d'ultrafiltration et mis à réagir avec 120 μl de tampon réducteur (DTT 10 mM, urée 8 M, TEAB 100 mM; pH 8, 0) à 60 ° C pendant 1 h. Après la réaction, IAA a été ajouté jusqu'à ce que la concentration finale soit de 50 mM, et le temps de réaction était de 40 min à température ambiante sans lumière. La solution au fond du tube collecteur a été jetée après centrifugation à 12 000 tr/min à 4 °C pendant 20 min. Après cela, 100 μl de tampon (TEAB 300 mM) ont été ajoutés au tube et centrifugés deux fois à 12 000 tr/min pendant 20 min. Après remplacement du tube de collecte, 100 μl de tampon (TEAB 300 mM) et 2 μl de solution de trypsine de qualité séquençage (1 μg / μl) ont été ajoutés au tube d'ultrafiltration et mis à réagir à 37 ° C pendant 12 h. Les peptides après enzymolyse ont été collectés après centrifugation à 12 000 rpm pendant 20 min. Ensuite, 50 µl de tampon (TEAB 200 mM) ont été ajoutés au tube et centrifugés à 12 000 tr/min pendant 20 min. La solution au fond du tube a été recueillie et lyophilisée. Deuxièmement, après enzymolyse et lyophilisation, les peptides ont été redissous avec 1 ml de TFA à 0, 1% et dessalés avec une colonne d'extraction en phase solide (SPE) RP-C18. Troisièmement, pour l'analyse LC-MS/MS, l'échantillon standard IRT et l'échantillon à tester ont été mélangés selon un rapport volumique de 1:10, et une analyse par spectrométrie de masse a été effectuée.

Après une séparation en phase liquide à pH élevé et une spectrométrie de masse liquide, les peptides enzymolysés de chaque échantillon ont été collectés séparément sur l'ordinateur, et une bibliothèque spectrale a été établie à l'aide du logiciel Spectreonaut Pulsar X pour l'analyse des données. Le test t a été effectué sur les valeurs répétées de chaque groupe pour calculer le changement de facteur et la valeur P de chaque groupe de comparaison, puis un dépistage à deux normes a été effectué (changement de facteur = 1,2, valeur P < 0,05). Les protéines (variation de pli > 1,2 ou < 5/6, valeur P < 0,05) ont été considérées comme des protéines exprimées de manière significativement différentielle, qui sont répertoriées et marquées de couleurs.

La vérification d'un grand échantillon des protéines (changement de pli> 1,2, valeur P <0,01) a été effectuée par dosage immuno-enzymatique (ELISA) à l'aide de kits commerciaux achetés auprès de RayBiotec, Inc. (Norcross, GA), R&D Systems (Minneapolis, MN) , et Abbexa, Inc. (Pékin, Chine). Les expériences ont été menées en suivant les procédures suggérées par le fabricant.

Concentrations de thrombospondine-1 (TSP1), de glutathion S-transférase oméga-1 (GSTO1), de chaîne bêta-C d'inhibine (INHBC), de tétranectine (CLEC3B), de protéine de matrice extracellulaire 1 (ECM-1) et de β-hCG dans le sérum de Les femmes IP et EP sont présentées sous forme de moyenne ± écart-type. Le test t a été effectué pour des échantillons indépendants des deux groupes selon les résultats de la vérification ELISA, et une valeur P < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Le test Hosmer-Lemeshow a été réalisé pour évaluer le degré d'étalonnage du modèle de prédiction. La courbe ROC a été réalisée par GraphPad Software (San Diego, CA), et l'aire sous la courbe (AUC), la sensibilité, la spécificité, la valeur prédictive positive et la valeur prédictive négative ont été calculées pour évaluer la valeur diagnostique de la PE.

Tous les sujets ont donné leur consentement éclairé à l'inclusion avant de participer à l'étude. L'étude a été menée conformément à la Déclaration d'Helsinki et le protocole a été approuvé par le Comité d'éthique du deuxième hôpital de Chine occidentale de l'Université du Sichuan (n° 124).

Tous les ensembles de données générés pour cette étude sont disponibles dans l'article.

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Ces auteurs ont contribué à parts égales : Dan Ma et Ruiqing Yang.

Département de médecine de réadaptation, West China Second University Hospital, Université du Sichuan, Chengdu, Sichuan, Chine

Dan Ma

École de médecine de l'ouest de la Chine de l'Université du Sichuan, Chengdu, Sichuan, Chine

Dan Ma, Ruiqing Yang, Yunlong Chen, Zhengyi Huang et Yuxin Shen

Key Laboratory of Birth Defects and Related Diseases of Women and Children (Université du Sichuan), Ministère de l'éducation, Chengdu, Sichuan, Chine

Dan Ma

Département du Centre de médecine de réadaptation, Hôpital de Chine occidentale, Université du Sichuan, Chengdu, Sichuan, Chine

Chengqi He

Laboratoire clé de médecine de réadaptation dans la province du Sichuan, Chengdu, Chine

Chengqi He

State Key Laboratory of Oral Diseases, National Clinical Research Center for Oral Diseases, Chengdu, Sichuan, Chine

Lixing Zhao

Département d'orthodontie, Hôpital de stomatologie de l'ouest de la Chine, Université du Sichuan, Chengdu, Sichuan, Chine

Lixing Zhao

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DM et RY ont rédigé le manuscrit. RY et YC ont effectué les procédures de laboratoire. ZH a effectué l'analyse statistique. YS a collecté et analysé des données. CH et LZ ont conçu l'expérience révisée et révisé de manière critique le manuscrit. Tous les auteurs ont examiné le manuscrit.

Correspondance avec Chengqi He ou Lixing Zhao.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

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Réimpressions et autorisations

Ma, D., Yang, R., Chen, Y. et al. Identification de biomarqueurs diagnostiques non invasifs pour la grossesse extra-utérine à l'aide de la protéomique d'acquisition indépendante des données (DIA) : une étude pilote. Sci Rep 12, 19992 (2022). https://doi.org/10.1038/s41598-022-23374-8

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Reçu : 23 avril 2022

Accepté : 31 octobre 2022

Publié: 21 novembre 2022

DOI : https://doi.org/10.1038/s41598-022-23374-8

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